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大鼠微量蛋白(mALB)ELISA試劑盒使用說明書
點擊次數:1090 更新時間:2019-04-30

大鼠微量蛋白(mALB)酶聯免疫分析(ELISA)

 

試劑盒使用說明書

 

本試劑盒僅供研究使用。

 

藥品名稱:

通用名:大鼠微量蛋白(mALB)酶聯免疫診斷試劑盒

使用目的

本試劑盒用于測大鼠血清、血漿、或其它相關組織液中微量蛋白(mALB)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠微量蛋白(mALB)水平。用純化的大鼠微量蛋白(mALB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入微量蛋白(mALB),再與 HRP 標記的抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的微量蛋白(mALB)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度

OD ,通過標準曲線計算樣品中大鼠微量蛋白(mALB)濃度。

試劑盒組成

1

20 倍濃縮洗滌液

30ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(270μg/L

0.5ml×1

3

酶標包被板

12 孔×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

標本要求

  1. 標本采集后盡早進行實驗。
  2. 不能檢測含NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的HRP活性。
  3. 可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

操作步驟

  1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,在、第二孔中分別加標準品 100μl,然后在、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。稀釋后各孔加樣量都為 50μl濃度分別為 180μg/L120μg/L  60μg/L30μg/L15μg/L
  2. 加樣:分別設空白孔空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同、待測樣品孔。在酶標包被板待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl品稀釋度為 5 。加樣時將樣品加于酶標板孔底部,輕輕晃動混勻。
  3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。


 

  1. 配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用
  2. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。
  3. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
  4. 溫育:操作同 3
  5. 洗滌:操作同 5
  6. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.
  7. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應此時藍色立轉黃色
  8. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度OD 。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

 

計算

以標準物的濃度為橫坐標,其 OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數, 即為樣品的實際濃度。

注意事項

  1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
  2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
  3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
  4. 請每次測定的同時做標準曲線,建議做復孔。如標本中待測物質含量過高樣本 OD 大于標準品孔孔的 OD ,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數n 后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數×n×5
  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準
  7. 底物請避光保存。
  8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
  9. 本試劑不同批號組分不得混用。
  10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

檢測范圍:

10μg/L

規格:

96 人份/

保存條件及有效期

  1. 試劑盒保存:;2-8℃。
  2. 有效期:6 個月

滬公網安備 31011802001676號

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