阿奇霉素快速檢測試劑盒說明書 |
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阿奇霉素 快速檢測試劑盒說明書 一、原理 本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中的殘留物阿奇霉素將和微孔條上預包被的 偶聯抗原競爭抗阿奇霉素抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物阿奇霉素的含量成 負相關，與標準曲線比較即可得出相應殘留物阿奇霉素的含量。 二、試劑盒特性 產品貨號： YJ63A\J1 靈 敏 度： 0.05ppb 孵育溫度： 25℃ 孵育時間： 30min～15min 樣本檢測下限 組 織 ······································· 0.5ppb 雞 蛋 ······································· 0.5ppb 牛 奶 ······································· 0.5ppb 交叉反應率 阿奇霉素（Azithromycin） ···················· 100% 紅霉素（Erythromycin） ···················· <1% 泰勒菌素（Tylosin） ···························· 30% 替米考星（Tilmicosin） ························ 23% 樣本回收率 組 織 ································· 70%~120% 三、試劑盒組成
四、所用儀器、試劑 具備的儀器： 酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、恒溫箱、打印機 微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道30～300 µl 試 劑：氫氧化鈉、甲醇 五、樣本前處理步驟 樣本處理前須知 （a）實驗中必須使用 一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭 （b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。 樣本前處理需配制： 配液1 提取液A 1份20X提取液A+ 19份去離子水混合。 配液2 提取液B 1份2X提取液B+ 1份去離子水混合。 配液3 1M NaOH溶液 稱取4g氫氧化鈉固體加去離子水定容至100ML。 配液4 10%甲醇 1份無水甲醇+ 9份去離子水混合 樣本處理： （a）組織樣本的處理方法 1、 稱2±0.05g均質后的組織至50ml離心管中，加入3ml提取液A，渦旋振蕩3min； 2、再加入600µl 1M NaOH溶液和2.4ml 提取液B，渦旋振蕩3min；室溫4000r/min以上離心5min； 3、取50 µl上層液體用于分析。（注：離心后若有脂肪層，去除脂肪層或撥開脂肪層，取清澈液體進行分析）。 樣本稀釋倍數： 4倍 此方法為多合一（組合Ⅱ）處理方法，樣本可合一處理。 （b）組織（雞肉、鴨肉）、雞蛋、牛奶樣本處理方法 1、 稱取均質后的新鮮樣本1±0.05g于50ml離心管中，加入5ml 10%甲醇，振蕩3min，室溫4000r/min以上離心5min； 2、 取50 µl上清用于分析。 樣本稀釋倍數: 5倍 六、 酶標免疫分析程序: 測定前應須知： 1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。 2、 使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。 3、 在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。 4、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。 操作步驟： 1、 從2～8℃冷藏環境中取出所需試劑，室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。 2、 取出框架及需要數量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。 3、 配液：洗滌液配制 將15ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水 按照1:19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子 水），或按所需用量配制洗滌液。 4、 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。 5、 加標準品/樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，25℃環境反應30min 6、 將孔內液體甩干，用洗滌液250µl/孔洗板4～5次，每次間隔15-～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。 7、 顯色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環境中避光顯色15min。 8、 測定：加入終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，5min內讀數），測定每孔OD值。 七、結果判定 結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含阿奇霉素量成負相關。 1、粗略判定： 用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.05ppb為1.816；0.15ppb為1.415；0.45ppb為0.74；1.35ppb為0.313；4.05ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb～4.05ppb；樣本2的濃度范圍是0.15ppb～0.45ppb，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中阿奇霉素實際濃度。 2、定量分析 （1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即 百分吸光率（%）＝B×100% B0 B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值 （2）標準曲線的繪制與計算 以標準品百分吸光率為縱坐標，以阿奇霉素標準品濃度（ng/ml）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中阿奇霉素實際濃度。 若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來電索取） 八、 注意事項 1、 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。 2、 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會伴隨著標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。 3、 混合要均勻，否則會出現重復性不好的現象。 4、 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。 5、 不要使用過了有效日期的試劑盒；稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑。 6、 不用的微孔板放進自封袋重新密封；標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。 7、 顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時，表示試劑可能變質。 8、 該試劑盒最佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。 九、儲藏條件和保質期 1、 儲藏條件：試劑盒于2～8℃保存，不要冷凍。 2、 保 質 期：該產品有效期為1年，生產日期見包裝盒。 提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣，酶標板仍然正常有效，不影響實驗結果，請放心使用。 實驗技術服務： |
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